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    Polysciences 24765-1試劑

    Polysciences 24765-1試劑

    更新時(shí)間:2024-06-12

    產(chǎn)品特點(diǎn):
    Polysciences 24765-1試劑,細胞轉染在基因表達和蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域至關(guān)重要。Polysciences 24765-1,作為一種有效的轉染試劑,能夠高效地將DNA引入細胞內。本文將詳細介紹Polysciences 24765-1的使用方法。
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    一、貼壁細胞轉染:Polysciences 24765-1試劑

    以293T細胞為例,需要精確控制轉染條件以確保*高效率。以下是具體步驟:

    細胞準備:

    使用膠原酶處理細胞并計數。在6孔板中以每孔2×106細胞接種。每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS 培養基和1 mL的細胞懸液,置于37℃,5%CO2培養箱培養24 h。24 h后,移除之前培養基,每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS。

    轉染過(guò)程:

    1.檢查細胞匯合度,達到70%-80%時(shí)開(kāi)始轉染。

    2.分別用兩份100 µL無(wú)血清培養基稀釋DNA,使DNA終濃度為1 µg/ml(DNA/總培養體積)和適當比例的適量Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例要依據自己實(shí)驗摸索最適比例。

    3.將稀釋的Polysciences 24765-1轉染試劑與質(zhì)粒(總體積200 µL)輕輕混勻,室溫孵育30 分鐘。

    4.PEI-DNA 復合物滴加到細胞培養板每個(gè)孔中,輕搖混勻。注意輕輕沿著(zhù)孔板邊緣滴入,以免破壞細胞的粘附性。

    5.將培養板放入37℃,5%CO2培養箱培養中培養24 h。

    結果觀(guān)察:

    在24小時(shí)后使用熒光顯微鏡觀(guān)察轉染效果,超過(guò)80%的293T 細胞在轉染后的24 h可以觀(guān)察到綠色熒光。

    二、懸浮細胞轉染:Polysciences 24765-1試劑

    懸浮細胞轉染步驟略有不同,小規模轉染時(shí),用新鮮的培養基重懸浮,使細胞密度達到 1×106cells/mL,如需大規模轉染細胞密度要到達2-3×106cellsml/mL。

    以293F細胞為例:

    細胞準備:

    傳代接種于20 mL 懸浮細胞生長(cháng)培養基中(36.5℃,120 rpm,5%CO2 )培養細胞至1×106 cells/mL的密度,旋緊瓶口放入搖床,2~4 小時(shí)后可以進(jìn)行轉染。

    轉染過(guò)程:

    1.用1 mL無(wú)血清培養基稀釋適量的DNA,使DNA 終濃度為1 µg/ml,混勻并靜置5 min。

    2.用1 mLOptiPRO

    SFM(無(wú)血清培養基)稀釋適當比例的PEI 40000,混勻并靜置10 min。

    3.將稀釋的24765-1轉染試劑與質(zhì)粒輕輕混勻,室溫孵育30分鐘。

    4.將PEI-DNA 轉染復合物逐滴加入到細胞培養液中,搖勻后旋緊瓶口放回搖床(36.5℃,5%CO2,120 rpm)。

    5.基因表達可在24-72小時(shí)后檢測,時(shí)間取決于細胞系和轉基因。



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